Expression of the rice hoja blanca virus (RHBV) non-structural protein 3 (NS3) in Escherichia coli and its in situ localization in RHBV-infected rice tissues

Abstract

El gen que codifica por la proteína no estructural NS3 del virus de la hoja blanca de arroz (RHBV) se fusionó al extremo carboxilo del gen de la glutationa-S-transferasa y se expresó en la cepa JM83 de Escherichia coli. Se obtuvieron altas concentraciones de la proteína de fusion (GST-NS3) en forma insoluble. La proteína de fusión se fraccionó en geles de SDS-PAGE, se purificó por electroelución, y se utilizó para producir anticuerpos policlonales en conejo . El antisuero producido se absorbió con extractos crudos de E. coli. Extractos crudos de plantas de arroz sanas e infectadas con el RHBV se evaluaron por Western blots detectándose una banda de peso molecular similar al estimado para la proteína NS3 (23KDa) en las plantas infectadas con el virus. Los tejidos provenientes de plantas infectadas con el RHBV se analizaron por medio de microscopia inmunoelectrónica con oro colloidal marcado con anticuerpos contra la proteína NS3 y la nucleoproteína viral N. Se observó una acumulación in situ de la proteína NS3 en el citoplasma, pero no se detectó en los cuerpos de inclusion, vacuolas o cloroplastos. Se demostró que la proteína NS3 sigue el mismo patron de distribución que el de la nucleoproteína viral N del RHBV.